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病毒載體系列丨腺相關(guān)病毒(AAV)載體

 

腺相關(guān)病毒AAV有表達(dá)滴度高、宿主免疫反應(yīng)輕微、感染譜廣、安全性高等優(yōu)勢(shì),成為近年來(lái)在基因治療領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的病毒載體之一。西美杰代理Cell Biolabs AAV Helper Free Expression System)的AAV三質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)是目前常用的一類AAV載體系統(tǒng)。

https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/VPK-402%20Fig%201_0.jpg

圖所示,該套AAV系統(tǒng)包含表達(dá)載體(Expression vector)、包裝質(zhì)粒Rep-Cap plasmid)和輔助質(zhì)粒pHelper plasmid)。其中表達(dá)載體是AAV病毒的核心,包含了ITR序列、CMV啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)等,用于攜帶外源基因;包裝質(zhì)粒負(fù)責(zé)表達(dá)AAV病毒的結(jié)構(gòu)蛋白,決定AAV的血清型和組織嗜性。由于野生型AAV是復(fù)制缺陷型的,必須依賴輔助病毒(如腺病毒)才可以感染靶細(xì)胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同質(zhì)粒上提供這些必要的輔助基因來(lái)確保重組AAV病毒具有感染性,消除AAV對(duì)輔助病毒的依賴,解決了AAV生產(chǎn)過(guò)程中要去除腺病毒污染難題。



?      Expression vector包含ITR序列,多克隆位點(diǎn),攜帶目的基因;

?      Rep-Cap plasmid包含RepCap基因,決定了重組AAV的血清型和組織嗜性;

?      pHelper plasmid 包含腺病毒的VA、E2AE4基因,使重組AAV具有感染性。

  1. AAV表達(dá)載體

AAV基因組為4.7kb,能夠攜帶的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8AAV的表達(dá)載體,兼容常用的各種AAV包裝系統(tǒng),表達(dá)載體都攜帶有2個(gè)ITR序列,使AAV基因組能正確形成T-形二級(jí)結(jié)構(gòu),進(jìn)而保證了病毒的有效復(fù)制和包裝。載體上有氨芐抗性基因、多克隆位點(diǎn),還可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇帶標(biāo)簽、無(wú)標(biāo)簽、不含啟動(dòng)子或自身互補(bǔ)型self-complementaryAAV表達(dá)載體(產(chǎn)品詳情如下表)。

貨號(hào)

質(zhì)粒名稱

載體容量(kb

特征

VPK-415

pAAV-IRES-Puro

1.8

Puro標(biāo)簽

VPK-416

pAAV-IRES-Neo

1.6

Neo標(biāo)簽

VPK-417

pAAV-IRES-Hygro

1.4

Hygro標(biāo)簽

VPK-418

pAAV-IRES-GFP

1.7

GFP標(biāo)簽

VPK-419

pAAV-IRES-Bsd

2

BSD標(biāo)簽

VPK-410

pAAV-MCS

3

無(wú)標(biāo)簽

VPK-411

pAAV-MCS Promoterless

4

無(wú)啟動(dòng)子

VPK-430

pscAAV-MCS

1.5

self-complementary

 

 

  1. AAV包裝質(zhì)粒

AAV共有12個(gè)血清型,其中AAV1-6是從人類組織中分離獲得,并且具有明確的的抗體反應(yīng)性,是目前常用的經(jīng)典AAV載體。盡管不同血清型AAV都具有正二十面體結(jié)構(gòu),但其衣殼蛋白在序列與空間構(gòu)象上的多樣性,使得AAV與不同細(xì)胞表面受體親和力及組織嗜性存在顯著差異。在感染嗜性方面,AAV-2的感染譜較廣應(yīng)用AAV-1在骨骼肌中的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率較高,AAV-3易于轉(zhuǎn)導(dǎo)巨核細(xì)胞,AAV-5AAV-6感染呼吸道上皮細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)較為顯著。因此,根據(jù)AAV不同血清型在組織感染性的相對(duì)特異性,可以用于在針對(duì)不同靶向組織的基因治療中尋求最佳的AAV載體類型與組合。除了常見的六個(gè)血清型AAV之外,Cell Biolabs還提供兩種重組型AAV包裝質(zhì)粒AAV-DJAAV-DJ-8,如下圖所示,這兩種AAVRep-Cap基因是由多個(gè)野生型AAV的結(jié)構(gòu)基因重組而來(lái),與其他野生型相比,AAV-DJ在體外細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率更高,AAV-DJ-8則更適用于體內(nèi)感染實(shí)驗(yàn)。

常用的AAV-2為參照,下表比較不同血清型AAV對(duì)種屬、組織細(xì)胞的感染率。值得一提的是,AAV-DJ對(duì)不同物種的肝細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞以及胚胎干細(xì)胞的感染能力都有絕對(duì)優(yōu)勢(shì),甚至高于常用的AAV-2。

輔助質(zhì)粒pHelper plasmid是確保重組AAV具有感染性的重要質(zhì)粒,pHelper載體中包含了腺病毒的E2AE4基因VA RNA,由于我們常用的AAV包裝細(xì)胞系293293T含有E1基因,因此該系統(tǒng)中的pHelper質(zhì)粒上沒(méi)有再提供E1基因。

AAV包裝質(zhì)粒貨號(hào)Rep-Cap&pHelper plasmids

VPK-401

VPK-402

VPK-403

VPK-404

VPK-405

VPK-406

VPK-400-DJ

VPK-400-DJ-8

細(xì)胞系

組織類型

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

人肝臟

13

100

2.5

0.0

0.1

10

500

0.2

HEK293

人腎臟

25

100

2.5

0.1

0.1

5

500

0.3

HeLa

人子宮

3

100

2.0

0.1

6.7

1

667

0.2

HepG2

人肝臟

3

100

16.7

0.3

1.7

5

1250

0.5

Hep1A

小鼠肝臟

20

100

0.2

1.0

0.1

1

400

0.1

911

人視網(wǎng)膜

17

100

11

0.2

0.1

17

500

0.0

CHO

倉(cāng)鼠卵巢

100

100

14

1.4

333

50

25000

5.0

COS

非洲綠猴腎臟

33

100

33

3.3

5.0

14

500

0.3

MeWo

人皮膚

10

100

20

0.3

6.7

10

2857

1.0

NIH3T3

小鼠成纖維

10

100

2.9

2.9

0.3

10

500

0.1

A549

人肺臟

14

100

20

ND

0.5

10

1000

0.1

HT1180

人成纖維

20

100

10

0.1

0.3

33

333

0.2

Monocytes

人原代單核細(xì)胞

1111

100

ND

ND

125

1429

100

ND

Immature DC

人樹突細(xì)胞

2500

100

ND

ND

222

2857

200

ND

Mature DC

人樹突細(xì)胞

2222

100

ND

ND

333

3333

100

ND

ND = Not Determined


 

西美杰代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套載體系統(tǒng)外,還有腺病毒(Adenovirus),慢病毒(Lentivirus)和逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retrovirus)載體系統(tǒng),為廣大科研用戶提供了高效、便捷的病毒載體產(chǎn)品庫(kù),小編之后還會(huì)一一為大家介紹這些病毒載體,敬請(qǐng)期待!

北京西美杰科技有限公司作為Cell Biolabs中國(guó)區(qū)代理,始終秉承著專業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度為廣大生物科技領(lǐng)域科研與企業(yè)客戶提供高品質(zhì)產(chǎn)品與優(yōu)質(zhì)服務(wù),如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣,歡迎隨時(shí)撥打全國(guó)客服熱400-050-4006或登錄西美杰官方網(wǎng)站m.glssly.com.cn查詢訂購(gòu)!

 

 

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