正確的洗板操作對(duì)于降低ELISA實(shí)驗(yàn)中的變異和消除背景干擾至關(guān)重要。如果您正在使用自動(dòng)化洗板設(shè)備或?qū)嶒?yàn)結(jié)果的變異程度高于預(yù)期，希望以下文章和視頻能幫助您優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果回歸正常。

手動(dòng)洗板的優(yōu)點(diǎn)

雖然ELISA洗板的目的是去除未結(jié)合的反應(yīng)物，但過度洗板會(huì)不同程度上導(dǎo)致抗體與目標(biāo)蛋白解離，從而導(dǎo)致吸光值偏低和%CV值偏高。此外，殘留液體去除不完全（通常發(fā)生在自動(dòng)洗板設(shè)備中）也會(huì)導(dǎo)致更高的檢測(cè)背景，這些對(duì)HCP ELISAs檢測(cè)尤為不利，因?yàn)?/span>其本身就具有較高的基線吸光值。

因此，Cygnus專家建議在使用Cygnus ELISA試劑盒時(shí)盡量采用手動(dòng)洗板的方法。該方法簡便易學(xué)，無需任何特殊設(shè)備。只要準(zhǔn)備一些低纖維吸水紙和一個(gè)洗瓶就可輕松操作，需要注意的是洗瓶的出水口要修剪成大開口斜面以確保洗液的充分流動(dòng)與合適的沖洗力度。

修剪洗瓶出水口

準(zhǔn)備工作：稀釋洗滌液并準(zhǔn)備好洗板操作區(qū)域

用蒸餾水將20×的濃縮洗滌液稀釋至1×洗滌液裝入洗瓶內(nèi)，將吸水紙鋪開放在水槽旁邊干凈的工作臺(tái)上。

注：請(qǐng)勿使用除ELISA試劑盒提供之外的其他洗滌液，這樣可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

第一步：倒出ELISA孔板內(nèi)的液體

用拇指按住ELISA板一側(cè)的中間位置，用食指按住另一側(cè)，從底部托起ELISA板?？梢杂媚粗负褪持缚圩?/span>孔板條或板條兩端的標(biāo)簽，以避免板條從板托中掉出。在水槽上方迅速翻轉(zhuǎn)孔板，借助手臂的力量快速向下移動(dòng)并突然停止，動(dòng)作要連貫，讓液體借助慣性從孔板內(nèi)甩入水槽。在操作正確的情況下，手指、孔板條和板托外側(cè)不應(yīng)沾上任何液體。然后重復(fù)這個(gè)傾倒動(dòng)作一次。

注：如果擔(dān)心孔板條從板托中掉出，可以在每個(gè)孔板條上提前標(biāo)注好位置。

第二步：用吸水紙吸干殘留液體，然后輕輕拍板

立即將倒扣的孔板按壓在吸水紙上，并將孔板移至吸水紙未使用的區(qū)域，輕輕拍板三次，每一次拍板都要在吸水紙未使用的區(qū)域。不要用力拍板，如果拍板力度過大會(huì)在板上傳遞不均勻的沖擊能量，致使抗體/分析物復(fù)合物的解離。

第三步：清洗孔板

用裝有1×洗滌液的洗瓶，從板的上邊一側(cè)開始，將洗滌液逐個(gè)填滿所有孔到溢出，直至最后一個(gè)孔，然后再按照步驟1和2的方法丟棄洗滌液并輕輕拍板。

注：不用擔(dān)心洗滌液從孔內(nèi)溢出，但要避免洗滌液在孔內(nèi)長時(shí)間浸泡。

重復(fù)上述步驟3次，總共進(jìn)行4次洗板操作。需要注意的是，在第2次和第4次洗板時(shí)，要從板的下邊一側(cè)反方向逐孔加入洗滌液。這樣操作可以確保所有孔的洗滌液總浸泡時(shí)間基本相同。另外，無需額外增加洗板次數(shù)，這樣可能會(huì)使結(jié)合在抗體上的分析物解離，導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度降低。

最后一次洗板后，還是按照步驟1和2所述的方法吸干/輕拍吸水紙。然后將ELISA板倒扣在吸水紙上靜置約20秒，以便徹底排干殘留液體，最后再在吸水紙上拍板4次。

注：每次拍板后，孔板最好能在手中水平旋轉(zhuǎn)180度，這樣可以確保板兩端的受力更加均勻。

第四步：擦干多余液體

用干凈的吸水紙擦拭孔板的底部外部，清除殘留的洗滌液。最后將洗好的ELISA板放回到實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)并加入底物。

注：不要讓孔板徹底晾干，否則酶的活性將會(huì)受到影響。底物要遠(yuǎn)離水槽，因?yàn)橄窗暹^程可能會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，導(dǎo)致孔板或者底物被污染，影響檢測(cè)結(jié)果。

最后，請(qǐng)觀看以下洗板操作視頻，幫助您快速掌握這一精確的技術(shù)！

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